蛋白穩(wěn)定性分析儀得到的曲線圖我們?cè)撊绾畏治觯?/h1>

點(diǎn)擊次數(shù)：302 更新時(shí)間：2025-08-19

　　蛋白穩(wěn)定性分析儀要在把蛋白放在逐漸升溫的環(huán)境里，實(shí)時(shí)看它什么時(shí)候開始“散架”。儀器會(huì)輸出一條曲線，橫軸是溫度，縱軸是熒光信號(hào)或光散射強(qiáng)度。讀圖的人只要抓住幾個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)，就能判斷蛋白穩(wěn)不穩(wěn)。

　　一、兩種常見信號(hào)

　　1.熒光信號(hào)：蛋白里有色氨酸。天然折疊時(shí)色氨酸被包在內(nèi)部，熒光弱；溫度升高后蛋白展開，色氨酸暴露，熒光迅速增強(qiáng)。

　　2.光散射：蛋白一旦聚集，顆粒變大，光散射值突增。

　　二、曲線長(zhǎng)什么樣

　　1.熒光曲線像一條緩慢上升的斜線，在某個(gè)溫度突然跳高，形成“S”形。

　　2.光散射曲線先平后陡，像折線。兩條曲線可疊加在同一張圖里。

　　三、關(guān)鍵溫度

　　1.Tm：熒光曲線中點(diǎn)對(duì)應(yīng)的溫度，表示一半蛋白已經(jīng)展開。Tm越高，蛋白越穩(wěn)定。

　　2.Tagg：光散射開始陡升的溫度，表示開始聚集。Tagg比Tm低，說(shuō)明蛋白先聚后展開，不穩(wěn)定。

　　四、看圖步驟

　　1.先看Tm：在軟件里點(diǎn)一下中點(diǎn)，讀出數(shù)值。野生蛋白Tm=60℃，突變體Tm=52℃，說(shuō)明突變后穩(wěn)定性下降。

　　2.再看Tagg：如果Tagg=55℃，Tm=60℃，兩者差8℃，蛋白在展開前已開始聚集。

　　3.看曲線形狀：曲線陡峭，說(shuō)明協(xié)同性好，一次全部展開；坡度平緩，說(shuō)明存在中間狀態(tài)，可能部分折疊。

　　五、注意事項(xiàng)

　　1.蛋白濃度要統(tǒng)一，常用0.1–0.5 mg/mL，濃度高會(huì)提前聚集。

　　2.升溫速率1℃/min常用，太快會(huì)低估Tm。

　　3.緩沖液pH和鹽濃度保持一致，否則對(duì)比無(wú)意義。

　　4.每批樣品測(cè)三次，Tm偏差在±0.5℃以內(nèi)才可信。

　　蛋白穩(wěn)定性分析儀的曲線圖就是一張“溫度-信號(hào)”折線圖。找到Tm和Tagg兩個(gè)數(shù)字，再比較它們的高低和距離，就能快速判斷蛋白是否穩(wěn)定、配方是否有效。

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